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促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

簡要描述:

上海信帆生物科技有限公司是一家的ELISA試劑盒供應商,提供ELISA試劑盒,生化法試劑盒,放免試劑盒等.全程提供技術指導,提供售后服務,有質量問題免費包退換,免除您實驗的后顧之憂。如有需要歡迎,也可以索要試劑盒說明書。

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促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

本試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體樣本中小鼠雌激素(E)的含量。

ELISA技術原理:以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底

物的高效催化作用相結合起來

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記 的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復性好。

 

 

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

 

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

注意事項:

1 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6 底物請避光保存。

7 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

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